真菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷-1真菌的標(biāo)本采集

真菌的標(biāo)本采集

衛(wèi)生部北京醫(yī)院 艾效曼

一、采集真菌標(biāo)本的目的

（一）常見(jiàn)真菌病的分類

常見(jiàn)真菌病分為淺部真菌病和深部真菌病。淺部真菌病分為淺表真菌病和皮膚真菌??；深部真菌病分為皮下真菌病和系統(tǒng)性真菌病。

了解真菌病的分類有利于在采集標(biāo)本時(shí)對(duì)不同菌種進(jìn)行目的性的采樣以及培養(yǎng)。

（二）主要真菌病病原及好發(fā)部分

淺部真菌病的好發(fā)部位主要是腳趾間、皮膚、生殖器區(qū)域，頭皮和面部，主要病原菌包括表皮癬菌屬，毛癬菌屬等。皮下真菌的好發(fā)部位主要是手、臂、足、腿，主要病原菌有申克孢子絲菌、疣狀瓶霉及其他真菌。系統(tǒng)性真菌病的主要好發(fā)部位以肺、皮膚、口腔、腸道及陰道為主，主要病原菌包括曲霉菌屬、酵母菌屬及新型隱球菌等。在取樣時(shí)，根據(jù)其好發(fā)部位及其異感病原體選擇適當(dāng)?shù)牟杉团囵B(yǎng)方法。

二、真菌標(biāo)本的采集

（一）呼吸道標(biāo)本的采集

1 、呼吸道標(biāo)本

（ 1 ）下呼吸道標(biāo)本：痰液、毛刷、支氣管肺泡灌洗液等；

（ 2 ）上呼吸道標(biāo)本：鼻咽部標(biāo)本。

在領(lǐng)取呼吸道標(biāo)本時(shí)同樣遵循的是應(yīng)當(dāng)在使用抗菌藥物前最好在清晨采集痰標(biāo)本，不要用非無(wú)菌的水漱口。若領(lǐng)取下呼吸道來(lái)源的痰標(biāo)本時(shí)，則不應(yīng)當(dāng)領(lǐng)取唾液或者鼻咽后壁的分泌物，應(yīng)將標(biāo)本收集在羅口無(wú)菌容器內(nèi)立即送檢，以防止其他的細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)。

2 、呼吸道常見(jiàn)真菌

呼吸道常見(jiàn)真菌有念珠菌屬、曲霉菌，免疫力低下患者可見(jiàn)卡氏肺孢子菌、莢膜組織胞漿菌、隱球菌。

3 、呼吸道標(biāo)本的真菌涂片檢測(cè)

（ 1 ）直接涂片檢測(cè)濕片檢測(cè)曲霉菌；

（ 2 ）革蘭染色檢測(cè)酵母樣真菌孢子及假菌絲；

（ 3 ）六甲亞基四胺銀染色檢測(cè)卡氏肺孢子菌；

（ 4 ）墨汁染色檢測(cè)隱球菌。

4 、呼吸道標(biāo)本的真菌培養(yǎng)基

呼吸道標(biāo)本的真菌培養(yǎng)基為克瑪嘉真菌顯色培養(yǎng)基；懷疑其他絲狀真菌時(shí)加種其他培養(yǎng)基。

（二）尿液標(biāo)本的采集

1 、尿液標(biāo)本

無(wú)菌中段尿 10-20ml 。

清潔中段尿標(biāo)本最為常用。最好由醫(yī)護(hù)人員采集或者在醫(yī)護(hù)人員的指導(dǎo)下由患者留取，避免樣本污染。此外還可以采取導(dǎo)尿法、穿刺法等，均為無(wú)菌留取。

2 、尿液標(biāo)本常見(jiàn)真菌

尿液標(biāo)本中常見(jiàn)的真菌多為念珠菌屬。

3 、尿液標(biāo)本真菌涂片

尿液標(biāo)本真菌涂片通采用 3000 轉(zhuǎn) / 分，離心 10 分鐘，涂片進(jìn)行革蘭染色查念珠菌屬及假菌絲。

4 、尿液標(biāo)本真菌培養(yǎng)基

尿液標(biāo)本真菌培養(yǎng)基最常用的是克瑪嘉真菌顯色培養(yǎng)基，進(jìn)行定量接種。

（三）泌尿生殖道標(biāo)本的采集

1 、生殖道標(biāo)本

采集生殖道標(biāo)本進(jìn)行微生物學(xué)檢查主要對(duì)象包括：出現(xiàn)宮頸炎、外陰陰道炎、尿道炎、盆腔感染、子宮內(nèi)膜炎或生殖道潰瘍的女性，或患有尿道炎、附睪炎、前列腺炎或生殖道潰瘍的男性病人。

女性標(biāo)本包括尿道分泌物、巴氏腺、尿道旁腺、陰道分泌物、宮頸分泌物、宮腔內(nèi)容物、羊水等。男性標(biāo)本包括尿道分泌物、前列腺按摩液、精液、附睪和睪丸。留取時(shí)用無(wú)菌拭子采集，特別是出現(xiàn)紅、腫、痛時(shí)進(jìn)行采集陽(yáng)性分辨率較高。采集時(shí)先用生理鹽水清潔創(chuàng)面，用無(wú)菌拭子粘取其邊緣或基底部的分泌物進(jìn)行送檢。

2 、生殖道標(biāo)本常見(jiàn)真菌

生殖道標(biāo)本中常見(jiàn)的真菌為念珠菌屬。在留取泌尿道生殖道標(biāo)本時(shí)盡量用無(wú)菌拭字采集粘膜上的標(biāo)本進(jìn)行涂片，可以看到白色假絲酵母菌。

3 、生殖道標(biāo)本真菌涂片

生殖道標(biāo)本建議直接進(jìn)行真菌涂片，行革蘭染色查念珠菌屬及假菌絲。

4 、生殖道標(biāo)本真菌培養(yǎng)基

生殖道標(biāo)本真菌培養(yǎng)基以克瑪嘉真菌顯色培養(yǎng)基為主，可以加入沙堡弱培養(yǎng)基。

（四）血液及無(wú)菌體液骨髓標(biāo)本

1 、血液及無(wú)菌體液標(biāo)本

菌血液的癥狀可分為時(shí)性間歇性和持續(xù)性，不清楚菌血癥類型時(shí)可依照下述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行血液培養(yǎng)：（ 1 ）發(fā)熱體溫大于 38 攝氏度；（ 2 ）體溫多低，低于 36 攝氏度；（ 3 ）白細(xì)胞數(shù)目增高大于 10 × 10⁹/L ；（ 4 ）中性細(xì)胞過(guò)少，小于 1 × 10⁹/L ；上述四項(xiàng)中患者出現(xiàn)一項(xiàng)或者以上均應(yīng)做血液培養(yǎng)。

由于血液或無(wú)菌血液中發(fā)生真菌感染時(shí)，真菌為絕對(duì)血養(yǎng)菌，因此當(dāng)懷疑真菌感染時(shí)一定要抽血兩瓶，抽血量為成人 5-8ml ，兒童每瓶抽 1-5ml 。抽血時(shí)宜選擇對(duì)間接性寒顫、發(fā)熱寒顫、體溫高峰前 0.5-1 小時(shí)取血，或于寒顫或發(fā)熱后 1h 進(jìn)行標(biāo)本采集，一般不建議在發(fā)熱高峰時(shí)抽血。血培養(yǎng)盡量選擇在抗菌藥物前進(jìn)行，推薦雙側(cè)雙瓶抽血，使真菌只在血樣瓶中。

2 、血液及無(wú)菌體液標(biāo)本常見(jiàn)真菌

血液中常見(jiàn)的真菌為念珠菌屬如白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌。近年來(lái)真菌血流的感染率逐年增加，一般發(fā)生于有基礎(chǔ)疾病或有廣譜抗菌素應(yīng)用史患者， 50% 發(fā)生在 ICU ，尤其多見(jiàn)于靜脈管患者，白色假絲酵母菌占念珠菌屬癥的 70-83% ，死亡率很高，接近 50% ，因此對(duì)于支管病人特別是滯留血管病人應(yīng)密切注意導(dǎo)管相關(guān)性血流感染。

3 、血液的培養(yǎng)

不同于細(xì)菌血流感染的血培養(yǎng)瓶良性報(bào)陽(yáng)時(shí)間，血培養(yǎng)瓶真菌感染大多在 48 小時(shí)后，報(bào)陽(yáng)性生長(zhǎng)曲線較細(xì)菌生長(zhǎng)曲線平緩，因此 48 小時(shí)后報(bào)陽(yáng)的血培養(yǎng)瓶，應(yīng)密切考慮真菌感染，同時(shí)加種真菌培養(yǎng)基。

（五）腦脊液標(biāo)本的采集

1 、腦脊液標(biāo)本

當(dāng)病原體通過(guò)血腦屏障系統(tǒng)進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)時(shí)，可引起感染，常見(jiàn)的真菌腦脊液感染為新型隱球菌，成人腦脊液送檢指標(biāo)為發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、頸項(xiàng)強(qiáng)直反射增強(qiáng)等，兒童和新生兒的臨床癥狀不為明顯。

腦脊液標(biāo)本的采集通常采取腰穿的方式，用消毒液和酒精消毒藥腰穿的部位，以避免標(biāo)本污染和對(duì)患者造成感染， 將取出的腦脊液順序打入無(wú)菌管并標(biāo)號(hào)，每管標(biāo)本兩毫升左右，如果做深化常規(guī)細(xì)菌學(xué)和細(xì)菌學(xué)技術(shù)則可以抽三管，應(yīng)將渾濁管和第二管、或第二管送細(xì)菌學(xué)檢測(cè)，特殊情況下可采用小腦延髓池或腦室穿刺術(shù) , 進(jìn)行腦脊液標(biāo)本的留取。

初始腦脊液收集應(yīng)在抗生素應(yīng)用之前，這樣可以顯著提高致病菌的檢出率?？股貞?yīng)用以后每?jī)傻饺焖蜋z一次腦脊液標(biāo)本以及監(jiān)測(cè)治療效果。當(dāng)懷疑腦脊液中有真菌感染時(shí)送腦脊液培養(yǎng)的同時(shí)應(yīng)送檢血培養(yǎng)。

2 、腦脊液標(biāo)本常見(jiàn)真菌及涂片檢測(cè)

腦脊液標(biāo)本中最常見(jiàn)的真菌為新型隱球菌，因此在留取腦脊液標(biāo)本后應(yīng)當(dāng)常規(guī)檢查新型隱球菌用墨汁染色檢查。

3 、腦脊液培養(yǎng)

腦脊液真菌培養(yǎng)時(shí)應(yīng)選擇沙堡弱培養(yǎng)基或顯色培養(yǎng)基，因?yàn)樾滦碗[球菌的生長(zhǎng)速度較其他念珠菌屬速度慢，因此在培養(yǎng)時(shí)應(yīng)當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，最長(zhǎng)可延至兩周。用于治療的抗真菌藥物濃度較高，在檢查腦脊液新型隱球菌時(shí)涂片的陽(yáng)性率應(yīng)要比培養(yǎng)的陽(yáng)性率要高，因此在送檢腦脊液檢查真菌時(shí)務(wù)必送檢墨汁染色，查新型隱球菌，不可以單獨(dú)送培養(yǎng)。

隱球菌腦膜炎是隱球菌通過(guò)呼吸隨塵埃一起進(jìn)入呼吸道內(nèi)，在由肺部經(jīng)血液進(jìn)入神經(jīng)系統(tǒng)而感染。由于腦脊液中缺乏正常血清中所含有的補(bǔ)體和抗隱球菌生長(zhǎng)因子，因此隱球菌性腦膜炎的發(fā)病率較高，其愈后也很差。目前國(guó)際上的死亡率高達(dá) 20%-30% 。該菌常有導(dǎo)致免疫力低下患者的源發(fā)病，因此當(dāng)患者免疫力低下出現(xiàn)發(fā)熱、頭痛、嘔吐或伴有神志改變、腦膜刺激癥明顯、頸項(xiàng)強(qiáng)直陽(yáng)性、個(gè)別視力模糊伴視盤水腫時(shí)高度懷疑隱球菌感染。送檢腦脊液時(shí)應(yīng)當(dāng)送檢墨汁染色查新型隱球菌。

（六）各類拭子及膿液標(biāo)本的采集

1 、拭子及膿液標(biāo)本

拭子及膿液標(biāo)本：傷口拭子、膿腫、組織活檢標(biāo)本、中耳拭子、眼拭子，在采集時(shí)要求嚴(yán)格無(wú)菌操作。

2 、傷口拭子常見(jiàn)真菌

傷口拭子常見(jiàn)真菌：念珠菌屬如白色假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌、近平滑假絲酵母菌、曲霉菌等。

3 、傷口拭子標(biāo)本的真菌涂片檢測(cè)

傷口拭子標(biāo)本的真菌涂片檢測(cè)：革蘭染色檢測(cè)酵母樣真菌孢子及假菌絲。

由于傷口標(biāo)本和各類拭子標(biāo)本位于體表，因此在標(biāo)本采集后，除培養(yǎng)目的外都應(yīng)直接加做涂片檢查。

4 、傷口拭子標(biāo)本的真菌培養(yǎng)基

在接種培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)當(dāng)接種沙保弱培養(yǎng)基，多為克瑪嘉真菌顯色培養(yǎng)基。常規(guī)培養(yǎng)最終的陰性報(bào)告通常為 28 天，以排除淺部真菌感染、絲狀真菌感染，如已長(zhǎng)出酵母樣真菌或只懷疑酵母樣真菌感染則需連續(xù)培養(yǎng) 5 日才能發(fā)陰性報(bào)告。

（七）頭發(fā)、皮屑、皮癬及指甲等標(biāo)本的采集

1 、頭發(fā)、皮屑、皮癬及指甲等標(biāo)本

用 75% 酒精消毒 , 盡量暴露感染部位，用無(wú)菌器具進(jìn)行皮屑的采集和送檢。

皮屑：皮損的邊緣、皰壁、膿液、深層趾（指）間皮屑或活動(dòng)邊緣皮屑；

甲屑：用細(xì)銼或牙科磨鉆取病甲與正常甲交界處并且貼近甲床部的甲屑；

毛發(fā)：取病發(fā) 15 根、 75% 酒精消毒， 3 ～ 5 根作直接鏡檢， 5 ～ 10 根種于 SDA 斜面（加氯霉素），稍劃破斜面掩埋。

2 、頭發(fā)、皮屑、皮癬及指甲等標(biāo)本常見(jiàn)真菌：

黃癬：許蘭黃癬病、罕見(jiàn)須癬毛癬菌、疣狀癬菌、犬小孢子菌；

毛孢子菌?。喊咨咦泳?、何德毛結(jié)節(jié)菌；

體癬：毛癬菌屬、表皮癬菌屬、小孢子菌屬；

疊瓦癬：紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、絮狀表皮癬菌；

甲真菌?。杭t色毛癬菌、須癬毛癬菌、罕見(jiàn)須癬毛癬菌等、白色念珠菌、白地霉、短帚霉、頭孢屬、支頂孢屬；

著色性真菌?。吼酄钇棵?、甄氏外瓶霉等。

3 、頭發(fā)、皮屑、皮癬及指甲等標(biāo)本的涂片檢測(cè)

潛部真菌的標(biāo)本常用直接涂片鏡檢濕片或染色。

如果是濕片則在載玻片上先滴加百分之十的氫氧化鉀，然后用透明膠帶在感染部位粘取標(biāo)本，將膠帶的標(biāo)本面貼于試劑上，顯微鏡高倍鏡下觀察菌絲和孢子形態(tài)，如不清晰可在另一張載玻片上加上棉蘭試劑，用透明膠帶粘取標(biāo)本，將膠帶的標(biāo)本面貼于燃料試劑上，在顯微鏡高倍鏡視野下觀察菌絲孢子形態(tài)。

（八）便標(biāo)本的采集

1 、便標(biāo)本

自然排便或直腸拭子：粘液部分 5-10g, 或稀便 5-10g 。

2 、便標(biāo)本的常見(jiàn)真菌

便標(biāo)本的常見(jiàn)真菌有卵圓形芽生孢子或假菌絲，念珠菌相關(guān)性腹瀉必須菌量大于 105CFU/ml ，并且在糞便涂片中找到假菌絲。

3 、便標(biāo)本的真菌培養(yǎng)基

便標(biāo)本的真菌培養(yǎng)基常用克瑪嘉真菌顯色培養(yǎng)基。

三、常用培養(yǎng)真菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基

（一）常用基礎(chǔ)培養(yǎng)基：沙堡弱培養(yǎng)基 Sabouraud dextrose agar （ SDA ）、馬鈴薯培養(yǎng)基 potato dextrose agar （ PDA ）、麥芽浸汁培養(yǎng)基 malt extract agar （ MEA ）、橄欖油培養(yǎng)基（ ODA ）、燕麥培養(yǎng)基 oatmeal agar （ OA ）、察氏培養(yǎng)基 Czapek agar(CZA) 、放線菌酮培養(yǎng)基（ DTM ）。

（二）常用顯色培養(yǎng)基：科馬嘉顯色培養(yǎng)基（ CHROMagar ）。

（三）少量的血清進(jìn)行培養(yǎng)可以進(jìn)行血清出芽實(shí)驗(yàn)。

聲明：以上內(nèi)容來(lái)自網(wǎng)絡(luò)，若有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系我們，立即刪除！所有的觀點(diǎn)由網(wǎng)友個(gè)人想法，不代表本公司也持此立場(chǎng)，感謝大家支持！

重慶英沐教育科技有限公司

YMU教育

重慶YMU教育_醫(yī)學(xué)繼續(xù)教育學(xué)分卡

重慶YMU教育_小學(xué)初中高中教育課后輔導(dǎo)

重慶YMU教育_執(zhí)業(yè)醫(yī)師護(hù)士藥師資格考試考前輔導(dǎo)

www.kawsbarofficials.com

www.ymujiaoyu.com

YMU教育(www.kawsbarofficials.com)，全國(guó)熱線電話：023-89119533；提供繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育學(xué)分、中小學(xué)課后輔導(dǎo)、美年大健康·慈銘體檢大牌定制健康體檢等服務(wù)；